material para treinar
Material e métodos
O comitê local de ética da Universidade Firat aprovou este estudo, e um consentimento informado por escrito foi obtido de cada sujeito. Um total de 45 pacientes internados no Centro Médico Firat, um hospital universitário de referência terciária localizado no leste da Anatólia, foram examinados. Os sinais e sintomas apresentados foram febre, queixas do sistema musculoesquelético, como dores generalizadas e dores associadas à fadiga, prostração e depressão mental. Achados clínicos e laboratoriais revelaram brucelose aguda. Todos os pacientes foram iniciados o tratamento adequado. No entanto, cinco pacientes foram excluídos do estudo por causa da não resposta ao tratamento. O estudo incluiu 40 casos de brucelose aguda (18 do sexo masculino e 22 do sexo feminino; entre 17 e 80 anos, média ± EP, 37,08 ± 8,76 anos).
A brucelose foi diagnosticada com base em dados clínicos, sorológicos, bacteriológicos e epidemiológicos. Os critérios diagnósticos foram o isolamento de uma espécie de Brucella da hemocultura (Bactec 9050, Sistema de Instrumentos de Diagnóstico Becton-Dickinson, Sparks, EUA) ou um único título de Brucella de ≥1 / 160 [por teste de aglutinação tubular padrão (STA) ou Coombs], confirmado por um teste de 2-mercaptoetanol (2-EM) com ≥1 / 160 em associação com achados clínicos compatíveis.
Utilizando o sistema de hemocultura BACTEC, as bactérias Brucella foram cultivadas e identificadas. Espécies de Brucella foram isoladas das hemoculturas em 22 casos (55%). A biotipagem das bactérias foi realizada pela produção de H2S, positividade da urease e teste de sensibilidade ao corante (20-40 µg / ml de fucsina básica e crescimento em tionina). Todas as espécies de Brucella foram identificadas como B. melitensis. A atividade da doença foi definida pela presença de sinais e sintomas típicos. Os dados do paciente foram registrados nos formulários previamente preparados.
O grupo controle foi composto por 20 indivíduos saudáveis ​​(nove homens e 11 mulheres), com idades variando entre 15 e 90 anos (média ± EP, 39,35 ± 7,53 anos). Não houve diferença estatisticamente significante entre as idades dos grupos. Os casos do grupo controle foram negativos para STA, mostraram VHS dentro dos limites normais e não apresentaram queixas. Os critérios de exclusão para os controles saudáveis ​​incluíram doenças agudas / crônicas, tabagismo, medicação, gravidez e quaisquer anormalidades nos testes de função renal e hepática.
Amostras de sangue foram coletadas de todos os pacientes e indivíduos saudáveis ​​para o estudo de células NK e NKT. Amostras de sangue venoso de dois mililitros foram obtidas e os soros foram separados nos grupos estudo e controle. As células T, NK e NKT [CD3 + e CD (16 + 56) +] foram estabelecidas a partir do sangue com EDTA. Após o isolamento das células mononucleares periféricas, foi aplicado o método de imunofluorescência direta. A análise citométrica de fluxo em duas cores foi realizada em um citômetro de fluxo FACScan (Becton Dickinson, San Jose, CA), utilizando anticorpos monoclonais Becton Dickinson CD45 / CD14, isotipo controle e CD3 / CD16 + 56, de acordo com as instruções do fabricante. As células foram fixadas com paraformaldeído a 1% e analisadas por citometria de fluxo, após a contagem de 10.000 eventos totais usando o software Cell Quest (Becton Dickinson). Esta subpopulação de linfócitos é expressa como percentagens do número total de linfócitos. Os critérios de qualidade envolveram a frequência acima de 95% do total de linfócitos na porta de análise, população homogênea de linfócitos CD45 + (mínimo de 2000 eventos no portão, CD45> 95%).
O tratamento para a brucelose foi iniciado assim que o diagnóstico foi estabelecido e envolveu a combinação de doxiciclina e rifampicina por 45 dias. Após o tratamento, os mesmos parâmetros estudados antes do início dos antibióticos foram medidos novamente em todos os pacientes. Os critérios de resposta ao tratamento foram melhorias dos achados clínicos com testes 2-ME ≤1 / 80 após o tratamento. Pacientes não respondedores apresentaram queixas contínuas, como febre, mialgia e outros sintomas constitucionais, com o teste 2-ME medindo ≥1 / 160 após o tratamento.